تهیه آنتی بادی های نوترکیب منوکلونال علیه شبه قارچ polymyxa betae

thesis
abstract

بیماری رایزومانیا یکی از مخربترین بیماری های ویروسی چغندر قند است. در این بیماری عملکرد کمی و کیفی چغندرقند تحت تاثیر قرار می گیرد. انتقال طبیعی عامل این بیماری توسط شبه قارچ polymyxa betaeصورت می پذیرد. اسپورهای استراحتی این شبه قارچ سال های زیادی می توانند در مزرعه آلوده زنده بمانند. به منظور ارزیابی کمی شبه قارچ p.betae در خاک و بافت آلوده، تهیه آنتی بادی های اختصاصی ضروری می باشد. پروتئین گلوتاتیون- اِس- ترانسفراز که در تمامی حالت های مورفولوژیکی p. betae وجود دارد می تواند به عنوان یک گزینه مناسب برای شناسایی این شبه قارچ در روش سرولوژیکی باشد.به این منظور ابتدا باکتری اشریشیاکلی توسط ناقل بیانی حاوی ژن gst تراریخته و بیان پروتئین به صورت انبوه انجام شد. خالص سازی پروتئین نوترکیب gst با استفاده از روش کروماتوگرافی تمایلی بر روی ستون نیکل صورت پذیرفت. پروتئین خالص gst در ایمونوتیوب ثابت گردید و پس از بلوکه شدن فضاهای خالی توسط شیر بدون چربی2% ، ذرات فاژ به لوله افزوده و فاژهای غیر اختصاصی آنها حذف شدند. فاژهای اختصاصی متصل به تیوب، جداسازی شده و برای تکثیر وارد سلول های در حال رشد باکتری اشریشیاکلی سویه tg1 شدند. فاژهای تکثیر یافته دوباره جدا سازی شده و برای افزایش ذرات اختصاصی دارای قابلیت اتصال به پروتئین gst سیکل فوق تکرار می شود. پس از انجام سه دور چرخه فوق، در حدود 100 عدد تک کلونی دارای فاژهای جداسازی شده انتخاب و به صورت جداگانه کشت شده و جهت تولید scfv مربوطه با iptg تحریک شدند. scfv تولید شده در باکتری وارد محیط کشت گردیده و پس از جداسازی با سانتریفیوژ برای تست الیزا و شناسایی کلون های اختصاصی مورد استفاده قرار گرفتند. کلون های مولد scfv اختصاصی جداسازی و برای تعیین تنوع با روش های rflp و تعیین ترادف مورد بررسی قرار گرفتند. آنالیزهای تکمیلی وسترن بلاتینگ و الیزا بر روی scfv های اختصاصی منفرد و با استفاده از عصاره های سالم و آلوده چغندرقند انجام شدند. برای خالص سازی و تولید انبوه آنتی بادی های نوترکیب، سویه باکتریایی hb2151 و یا bl21-de3 با پلاسمیدهای phen حامل ژن های scfv اختصاصی تراریخته شدند. باکتری تراریخته در محیط کشت lb حاوی آنتی بیوتیک آمپی سیلین در 37 درجه سانتیگراد رشد یافته و هنگامی که od محیط کشت به عدد یک رسید، iptg استریل به کشت باکتریایی تا غلظت یک میلی مولار افزوده شد و کشت در دمای30 درجه سانتیگراد ادامه یافت. پس از سه ساعت سلول های باکتریایی با سانتریفیوژ جداسازی و scfv تجمع یافته در فضای پیش پلاسمایی با روش شوک اسمزی جدا گردید. در این تحقیق در نهایت آنتی بادی مونوکلونالی تولید شد که بر اساس نتایج آزمون های الیزا، وسترن بلاتینگ و دیبا به خوبی قادر به شناسایی و تفکیک نمونه های سالم و آلوده به شبه قارچ p. betae هستند.

First 15 pages

Signup for downloading 15 first pages

Already have an account?login

similar resources

تولیذ آنتی بادی پلی کلونال علیه قارچ polymyxa betae

بیماری ریشه گنایی چغندر قند (ریزومونیا)، یکی از مهمترین بیماری های ویروسی در چغندر قند می باشد. عـامـل این بیماری ویــروس زردی نکروتیک رگبـرگ چغنـدر قنــد است. قارچ polymyxa betae در ریشه گیاهان آلوده به صورت پارازیت اجباری رشد می کند و به عنوان تنها ناقل طبیعی این ویروس شناخته شده است. شناسائی گیاهان آلوده به قارچ عمدتا بر اساس مشاهده مستقیم اسپور های استراحتی درون بافت ریشه گیاه می باشد. علی ...

15 صفحه اول

استفاده ازتکنولوژی پروتئین نوترکیب برای تهیه آنتی بادی اختصاصی علیه ناقل بیماری رایزومونیا در چغندرقند

بیماری ریشه‌گنایی )رایزومانیا ( از مهمترین بیماری‌های ویروسی چغندر¬قند می‌باشد. عـامـل این بیماری ویروس رگبرگ زرد نکروتیک چغندر قند می¬باشد. قارچ Polymyxa betae به عنوان تنها ناقل طبیعی این ویروس شناخته شده است. با توجه به ماهیت پارازیت اجباری ناقل و عدم قابلیت کشت در آزمایشگاه، شناسایی گیاهان آلوده معمولا بر اساس مشاهده میکروسکوپی انجام می¬شود. در این تحقیق به منظور تسهیل در روند شناسایی، آنتی...

full text

استفاده ازتکنولوژی پروتئین نوترکیب برای تهیه آنتی بادی اختصاصی علیه ناقل بیماری رایزومونیا در چغندرقند

بیماری ریشه‌گنایی )رایزومانیا ( از مهمترین بیماری‌های ویروسی چغندر¬قند می‌باشد. عـامـل این بیماری ویروس رگبرگ زرد نکروتیک چغندر قند می¬باشد. قارچ Polymyxa betae به عنوان تنها ناقل طبیعی این ویروس شناخته شده است. با توجه به ماهیت پارازیت اجباری ناقل و عدم قابلیت کشت در آزمایشگاه، شناسایی گیاهان آلوده معمولا بر اساس مشاهده میکروسکوپی انجام می¬شود. در این تحقیق به منظور تسهیل در روند شناسایی، آنتی...

full text

تهیه و تخلیص آنتی بادی منوکلونال علیه آنتی ژن لیپوآرابینومان مانوزیله مایکوباکتریوم بویس

مقدمه و هدف: لیپوآرابینومان مانوزیله (manlam)­ از آنتی­ژن های گلیکولیپیدی است که درصد قابل توجهی از دیواره سلولی باکتری مایکوباکتریوم بویس ب ث ژ را تشکیل می دهد. نظر به اینکه تولید آنتی بادی منوکلونال آن، به­ویژه در طراحی کیت تشخیص سریع بیماری سل  کاربردهایی فراوان دارد، لذا هدف از تحقیق حاضر، تولید آنتی بادی منوکلونال ضد این آنتی­ژن می باشد.  مواد و روش کار: پس از تزریق های منظم موش های balb/c...

full text

آنتی بادی های منوکلونال

تکنولوژی تهیه مقادیر زیاد آنتی بادی خاص یک شاخص آنتی ژنی موجب دگرگونی و تحول عظیم در علوم پزشکی گردید. آنتی بادی های منوکلونال اختصاصاً به یک اپی توپ خاص متصل می گردند و به همین خاطر از نظر ژنتیکی و متابولیسم سلولی همگن هستند و همه از یک کلاس معین ایمونوگلوبینی با خصوصیات شیمیایی و فیزیکی یکسان و با جزئیات کامل شبیه به هم هستند. امروزه با تولید نسل جدید آنتی بادی های منوکلونال نوترکیب با استفاده...

full text

بیش بیان و تخلیص نانوبادی های نوترکیب و تهیه آنتی بادی ثانویه کونژوگه علیه آنها

هدف: قطعه متصل شونده به آنتی ژن از آنتی بادی های زنجیره سنگین شتری به صورت یک تک دومن(vhh )می باشند. ساختار کریستالی یک vhh خالص نشان داده است که این مولکول در حدود5/2 نانومتر قطر و کمتر از 4 نانومتر طول دارد. به همین علت به این مولکول نانوبادی گفته می شود. شباهت زیاد این مولکولها به vh انسانی موجب می شود که این مولکول کاربرد بالقوه در تشخیصهای ایمنی و نیز ایمنی درمانی داشته باشد. یکی از مواد م...

full text

My Resources

Save resource for easier access later

Save to my library Already added to my library

{@ msg_add @}


document type: thesis

وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه شاهد

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023